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伯樂(Bio-Rad)的CFX Opus Deepwell實時熒光定量PCR系統是一款高性能、高通量的96孔深孔板qPCR儀。要讓它順利運行,您需要搭配以下幾類試劑和耗材:
一、伯樂CFX Opus Deepwell實時熒光定量PCR核心試劑:qPCR預混試劑
這是進行實驗最關鍵的化學物質,通常包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液等。您需要根據實驗類型選擇:
1、探針法預混液:
特點:特異性高,適合多重檢測。需要設計并合成熒光標記的探針(如TaqMan探針)。
伯樂推薦:SsoAdvanced™ Universal Probes Supermix
其他通用品牌:TaKaRa、Thermo Fisher、Qiagen等公司的探針法預混液也兼容。
2、染料法預混液:
特點:成本較低,使用方便,無需設計探針。染料(如SYBR Green I)會與所有雙鏈DNA結合發出熒光。
伯樂推薦:SsoAdvanced™ Universal SYBR® Green Supermix
其他通用品牌:同樣,市面上主流的SYBR Green預混液基本都可以在該儀器上使用。
3、一步法RT-qPCR預混液:
特點:如果您是從RNA直接進行定量PCR,需要這種試劑。它將逆轉錄和qPCR反應整合在同一個管中進行。
伯樂推薦:iScript? One-Step RT-PCR Kit with SYBR? Green 或 iTaq? Universal Probes One-Step Kit
選擇建議:伯樂自家的預混液經過優化,兼容性好,但儀器也開放,支持第三方試劑。您可以根據實驗的靈敏度、特異性要求和預算進行選擇。
二、伯樂CFX Opus Deepwell實時熒光定量PCR核心耗材
這部分是直接與儀器和樣品接觸的物理組件。
1、qPCR板:
類型:必須使用96孔深孔板。CFX Opus Deepwell型號的加熱塊是為深孔板設計的,與標準板不兼容。
規格:常見的容積有0.2 mL。
材質:推薦使用聚丙烯材質的硬板,光學性能好,導熱均勻。
封膜:板子需要配合專用的封板膜使用。
2、封板膜:
光學透明封板膜:這是常用的類型,必須確保其光學性能優異,不會在qPCR的熒光通道產生自發熒光。
伯樂推薦:Microseal ‘B’ Seal, 光學透明封板膜。這是伯樂儀器的標準配置,兼容性良好。
其他品牌:其他公司生產的適用于96孔深孔板的光學透明封板膜也可以使用,但務必確認其光學性能和粘合性。
三、輔助耗材與工具
1、八聯管和管蓋:
如果您不想使用整板,也可以使用獨立的0.2 mL 八聯管及對應的平蓋或凸蓋。同樣需要確保是深孔規格。
使用八聯管時,需要將它們正確地放置在儀器的96孔板架上。
2、移液器及吸頭:
移液器:需要覆蓋從微升級到毫升級的精確移液。
帶濾芯的吸頭:強烈推薦使用,尤其是在處理RNA或進行高靈敏度實驗時,可以防止氣溶膠污染和交叉污染。
多通道移液器:可以大大提高在96孔板中加樣的效率。
四、總結
1、qPCR預混液
推薦品牌/型號:Bio-Rad: SsoAdvanced™ 系列 根據探針法/染料法選擇。其他: TaKaRa, Thermo Fisher, Qiagen等。
2、一步法RT-qPCR試劑
Bio-Rad: iScript™ 或 iTaq™ One-Step系列,用于RNA模板。
3、96孔深孔板
Bio-Rad: Hard-Shell? 96-Well PCR Plates (深孔),必須是深孔板
。
4、光學透明封板膜
Bio-Rad: Microseal ‘B’ Seal,密封性好,無熒光干擾。
5、八聯管及管蓋
Bio-Rad或其他品牌的0.2 mL深孔八聯管,可選,用于非整板實驗。