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伯樂(lè) GelDoc XR+ 凝膠成像系統(tǒng)使用說(shuō)明書(shū)。本說(shuō)明將包含系統(tǒng)介紹、快速上手指南、詳細(xì)操作流程、軟件使用要點(diǎn)以及維護(hù)與故障排查。
一、伯樂(lè) GelDoc XR 凝膠成像系統(tǒng)概述
GelDoc XR+ 是一款高性能的凝膠成像系統(tǒng),用于對(duì)蛋白質(zhì)凝膠、核酸凝膠、印跡膜等進(jìn)行高靈敏度、高分辨率的圖像采集和分析。其核心特點(diǎn)包括:
1、高分辨率 CCD 相機(jī):提供清晰的圖像。
2、專(zhuān)業(yè)級(jí)光源:包含透射紫外(UV)、透射白光、側(cè)白光/藍(lán)光(用于染色凝膠如考馬斯亮藍(lán)、SYBR® 安全染料等)。
3、暗箱式設(shè)計(jì):隔絕環(huán)境光,保證成像質(zhì)量。
4、集成軟件:標(biāo)配 Image Lab™ 軟件,用于圖像采集、分析和定量。
二、伯樂(lè) GelDoc XR 凝膠成像系統(tǒng)主要組件
1、主機(jī)暗箱:包含內(nèi)部樣品臺(tái)、鏡頭、濾鏡輪和光源。
2、高清 CCD 相機(jī):安裝在暗箱頂部。
3、觸摸屏控制面板:位于暗箱前方,用于快速控制光源、鏡頭對(duì)焦和初步預(yù)覽。
4、電腦工作站:預(yù)裝 Image Lab 軟件。
5、專(zhuān)用紫外防護(hù)眼鏡:使用紫外光源時(shí)必須佩戴!
6、樣品托盤(pán):用于放置凝膠、膜或培養(yǎng)皿。
三、伯樂(lè) GelDoc XR 凝膠成像系統(tǒng)快速入門(mén)
目標(biāo): 快速獲取一張 EB 染色的 DNA 凝膠圖像。
1、準(zhǔn)備與放置樣品:
(1)打開(kāi)暗箱門(mén),將染好 EB 的瓊脂糖凝膠放在樣品托盤(pán)中部。
(2)關(guān)閉暗箱門(mén)。
2、使用觸摸屏預(yù)覽和對(duì)焦:
(1)在觸摸屏上,選擇 “UV" 光源圖標(biāo)。
(2)點(diǎn)擊 “Live Preview" (實(shí)時(shí)預(yù)覽)按鈕。系統(tǒng)會(huì)打開(kāi)紫外燈,并在觸摸屏上顯示圖像。
(3)使用 “Focus" (對(duì)焦)區(qū)域的 “+/-" 按鈕手動(dòng)調(diào)節(jié)焦距,直至條帶清晰。
(4)點(diǎn)擊 “Stop Preview" 停止預(yù)覽。
3、在電腦軟件上采集圖像:
(1)在電腦上打開(kāi) Image Lab 軟件。
(2)點(diǎn)擊主界面左上角的 “Capture" (采集)按鈕。
(3)在彈出窗口中選擇合適的預(yù)設(shè)(如 “Ethidium Bromide Gel")。
(4)點(diǎn)擊 “Start Capture"。圖像會(huì)自動(dòng)采集并顯示在軟件主窗口中。
四、詳細(xì)操作流程
1、步驟 1:開(kāi)機(jī)
(1)打開(kāi)電腦,進(jìn)入操作系統(tǒng)。
(2)打開(kāi)凝膠成像系統(tǒng)主機(jī)背面的電源開(kāi)關(guān)(暗箱右側(cè)或后方)。
(3)啟動(dòng) Image Lab 軟件。軟件會(huì)自動(dòng)與相機(jī)連接。
2、步驟 2:放置樣品
(1)戴上紫外防護(hù)眼鏡(如需使用紫外光)。
(2)向上輕提并打開(kāi)暗箱門(mén)。
(3)將樣品(凝膠、膜等)平放在樣品臺(tái)中心。對(duì)于小膠,可調(diào)整樣品托盤(pán)位置。
(4)確保暗箱門(mén)關(guān)閉。
3、步驟 3:選擇成像方法(預(yù)設(shè))
(1)Image Lab 軟件的核心是 “Protocols"(預(yù)設(shè))。它自動(dòng)配置了光源、濾鏡、曝光時(shí)間、光圈等所有參數(shù)。
(2)在 “Capture" 窗口左側(cè),點(diǎn)擊 “Select Protocol"。
(3)從列表中選擇接近你樣品的預(yù)設(shè):
Ethidium Bromide Gel:用于EB染色的核酸凝膠。
SYBR® Safe Gel:用于SYBR安全染料的凝膠(使用藍(lán)光或白光)。
Stain-Free Gel:用于伯樂(lè)熒光免染膠。
Coomassie Blue Gel:用于考馬斯亮藍(lán)染色的蛋白膠(使用白光)。
Chemiluminescence:用于化學(xué)發(fā)光膜(關(guān)閉所有光源,長(zhǎng)時(shí)間曝光)。
Colorimetric:用于比色法膜(如NBT/BCIP,使用白光)。
Multicolor Fluorescence:用于多重?zé)晒狻?/span>
4、步驟 4:預(yù)覽、對(duì)焦與調(diào)整
(1)預(yù)覽:點(diǎn)擊 “Live Preview" 按鈕,軟件會(huì)按預(yù)設(shè)打開(kāi)光源并顯示實(shí)時(shí)圖像。觸摸屏也可進(jìn)行此操作。
(2)對(duì)焦:
手動(dòng):使用軟件界面或觸摸屏上的對(duì)焦按鈕。
自動(dòng):點(diǎn)擊軟件中的 “Auto-Focus" 按鈕。
(3)調(diào)整曝光:
如果條帶過(guò)亮/過(guò)暗,在預(yù)覽模式下,調(diào)整 “Exposure Time"(曝光時(shí)間)。軟件通常有 “Auto-Expose"(自動(dòng)曝光)按鈕,點(diǎn)擊后可自動(dòng)計(jì)算合適時(shí)間。
也可手動(dòng)調(diào)整光圈(Aperture)或相機(jī)增益(Gain),但初學(xué)者建議使用自動(dòng)或僅調(diào)曝光時(shí)間。
5、步驟 5:采集與保存圖像
(1)確認(rèn)預(yù)覽圖像滿(mǎn)意后,點(diǎn)擊 “Start Capture"(開(kāi)始采集)。
(2)采集完成后,圖像會(huì)出現(xiàn)在軟件主窗口的 “Image Window"(圖像窗口)中。
(3)立即保存:點(diǎn)擊工具欄的軟盤(pán)圖標(biāo) “Save",或按 Ctrl+S。
建議格式:原始數(shù)據(jù)保存為 .scn 格式(Image Lab 專(zhuān)用,包含所有數(shù)據(jù))。同時(shí)可另存為 .tiff(用于出版,無(wú)壓縮)或 .jpg(用于報(bào)告)。
五、 Image Lab 軟件基礎(chǔ)分析功能
1、泳道與條帶分析(適用于凝膠):
(1)點(diǎn)擊工具欄的 “Lanes and Bands"(泳道和條帶)圖標(biāo)。
(2)軟件會(huì)自動(dòng)識(shí)別泳道(可手動(dòng)調(diào)整)。點(diǎn)擊 “Bands" 標(biāo)簽,它會(huì)自動(dòng)檢測(cè)條帶。
(3)查看右側(cè)的 “Quantity Table"(定量表),可看到每個(gè)條帶的相對(duì)分子量(MW)、相對(duì)濃度(基于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)或相對(duì)強(qiáng)度)。
2、分子量標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn):
(1)在泳道分析界面,右鍵點(diǎn)擊已知分子量標(biāo)準(zhǔn)的泳道,選擇 “Lane Standard"。
(2)在彈出的對(duì)話(huà)框中,輸入各條帶對(duì)應(yīng)的分子量值。
(3)軟件會(huì)自動(dòng)生成標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),并據(jù)此計(jì)算未知樣品的分子量。
3、圖像調(diào)整:
(1)使用 “Adjust Image"(調(diào)整圖像)工具可以調(diào)整圖像的亮度、對(duì)比度、飽和度和銳度。
(2)重要:用于發(fā)表的圖像,所有調(diào)整必須在圖注中說(shuō)明。定量分析使用原始圖像。
六、安全注意事項(xiàng)與日常維護(hù)
1、安全性
(1)紫外光危害:使用紫外光源時(shí),必須佩戴隨機(jī)附帶的紫外防護(hù)眼鏡,并避免皮膚直接暴露在紫外燈下。預(yù)覽時(shí)盡量關(guān)閉觀察窗。
(2)化學(xué)品污染:處理含有染料的凝膠時(shí),需戴手套。避免EB等有害物質(zhì)污染樣品臺(tái)或暗箱內(nèi)部。
(3)電氣安全:保持設(shè)備干燥,清潔前斷開(kāi)電源。
2、日常維護(hù):
(1)清潔樣品臺(tái)/托盤(pán):使用后,用柔軟的濕布蘸取溫和清潔劑擦拭,再用清水擦拭干凈。
(2)清潔暗箱內(nèi)部:定期用吹氣球或軟毛刷清除灰塵。
(3)清潔觀察窗/紫外防護(hù)板:使用鏡頭紙或軟布蘸取玻璃清潔劑輕輕擦拭。
(4)相機(jī)鏡頭:非專(zhuān)業(yè)人員請(qǐng)勿自行拆卸清潔。如有灰塵,聯(lián)系工程師。
3、關(guān)機(jī)順序:
(1)關(guān)閉 Image Lab 軟件。
(2)關(guān)閉電腦。
(3)關(guān)閉凝膠成像系統(tǒng)主機(jī)背面的電源開(kāi)關(guān)。
最后建議:
詳細(xì)手冊(cè):對(duì)于高級(jí)功能和軟件設(shè)置,請(qǐng)務(wù)必參閱隨機(jī)的 《Image Lab 軟件用戶(hù)指南》 PDF。
技術(shù)支持:如遇無(wú)法解決的問(wèn)題,請(qǐng)聯(lián)系伯樂(lè)(Bio-Rad)當(dāng)?shù)丶夹g(shù)支持部門(mén),并提供儀器序列號(hào)和軟件版本號(hào)。