Bio-Rad伯樂CFX Opus96實時熒光定量PCR系統，您在選擇染料時需要了解該儀器的核心特性。核心結論：CFX Opus96是一款支持多種檢測通道的實時熒光定量PCR儀，因此它兼容市面上絕大多數常見的qPCR染料和探針。您可以根據實驗需求，從以下幾類染料中進行選擇：

一、伯樂CFX Opus96實時熒光定量PCR儀通用型DNA結合染料

這類染料可以與任何雙鏈DNA分子結合并發出熒光，適用于大多數基礎的基因表達分析（RT-qPCR）和基因分型實驗

1、特點：

成本低： 按反應次數計算，比探針法便宜很多。

使用簡便： 只需在設計引物時確保擴增產物單一、特異即可。

通用性強： 一套染料可用于所有基因的檢測。

2、常見選擇：

SYBR Green I： 經典、常用的qPCR染料，靈敏度高。

EvaGreen： 穩定性比SYBR Green更好，在高濃度時抑制PCR效應的程度更低，尤其適合進行高分辨率熔解曲線分析。

BioRad自家的CFX Manager軟件中也預置了這些染料的檢測方案。

注意事項：

由于它會與所有雙鏈DNA（包括引物二聚體和非特異性擴增產物）結合，因此對引物的特異性和PCR反應條件要求較高。數據分析時，必須進行熔解曲線分析，以確認擴增產物的單一性。

二、伯樂CFX Opus96實時熒光定量PCR序列特異性探針

這類染料通過一個與目標序列特異性結合的寡核苷酸探針來發光，特異性高。

1、特點：

特異性強： 只有存在目標序列時才會產生熒光信號，有效避免了引物二聚體等的干擾。

可進行多重檢測： 使用不同熒光標記的探針，可以在一個反應管內同時檢測多個靶基因。

成本較高： 需要為每個檢測靶點合成特定的探針。

2、常見選擇：

TaqMan 探針： 最主流的探針技術，CFX Opus96兼容。它采用FRET原理，探針一端標記報告熒光基團（如FAM, HEX, VIC, CY5等），另一端標記淬滅基團。

分子信標： 另一種形式的探針，發夾結構，特異性也很好。

FRET 探針： 使用兩條相鄰的探針，常用于羅氏LightCycler系統，但CFX Opus96同樣可以檢測。

關鍵點：

選擇探針法時，您需要確認探針上所標記的熒光基團的激發/發射光譜是否在CFX Opus96的檢測通道內。幸運的是，CFX Opus96的濾光片組非常標準，支持FAM, HEX, VIC, ROX, Texas Red, CY5等常見熒光基團。

3、其他新型染料

一些為特殊應用開發的染料也可以在CFX Opus96上使用。

HRM染料： 如LCGreen、SYTO 9等，專門用于高分辨率熔解曲線分析，進行SNP分型、突變掃描和甲基化分析。CFX Opus96是進行HRM分析的優秀平臺。

雙標記探針： 除了TaqMan，還有許多其他廠商提供的類似原理的雙標記探針。

三、總結與選擇建議

1、對于絕大多數常規實驗（如檢測某幾個基因的表達量）： 從 SYBR Green I 或 EvaGreen 開始。且CFX Opus96對其有支持。

2、當實驗對特異性要求高，或者需要在一個孔里檢測多個基因時： 選擇 TaqMan 探針法。您可以從各大生物公司（如Thermo Fisher, IDT, 等）訂購針對您目標基因的探針。

3、如果需要做SNP分型或突變檢測： 選擇 EvaGreen 或其他專用的 HRM染料，并利用CFX Opus96的HRM功能。