艾本德 Eppendorf 5810是一款非常經(jīng)典且功能強(qiáng)大的臺(tái)式高速離心機(jī)。它結(jié)合了大容量和高速的特點(diǎn)，并帶有制冷功能，廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)等實(shí)驗(yàn)室。下面我將為您提供一個(gè)詳細(xì)的操作使用案例，以“從哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)上清中提取外泌體"這一常見(jiàn)實(shí)驗(yàn)為例，展示其標(biāo)準(zhǔn)操作流程和注意事項(xiàng)。

一、艾本德5810臺(tái)式離心機(jī)操作步驟

1、第1步：開機(jī)與預(yù)冷

（1）開機(jī)： 按下離心機(jī)正面右下角的電源開關(guān)。

（2）預(yù)冷：

由于外泌體提取需要在低溫下進(jìn)行，必須開啟制冷。

點(diǎn)擊屏幕上的 “Temp" 按鈕，使用數(shù)字鍵盤輸入目標(biāo)溫度 4°C，然后按 “Enter" 確認(rèn)。

此時(shí)離心機(jī)腔體開始降溫。等待腔體溫度穩(wěn)定在4°C后再進(jìn)行離心。（小技巧：可以提前半小時(shí)開機(jī)預(yù)冷）

2、第2步：低速離心去除大顆粒雜質(zhì)

（1）平衡：

將裝有細(xì)胞培養(yǎng)上清的50mL離心管兩兩配對(duì)，確保重量平衡。（關(guān)鍵步驟：重量差必須 < 0.1g）

用天平精確稱重，如果不平衡，用PBS或上清液進(jìn)行調(diào)整。

（2）放置樣本： 將平衡好的離心管對(duì)稱地放入轉(zhuǎn)子中。

（3）參數(shù)設(shè)置：

轉(zhuǎn)速/離心力： 按 “Speed" 鍵，輸入 2000，然后按屏幕提示切換單位至 “× g"，按 “Enter"。

溫度： 已設(shè)為 4°C。

時(shí)間： 按 “Time" 鍵，輸入 30，然后按 “Enter"（單位：分鐘）。

加速/減速檔位： 按 “Accel" 和 “Decel" 鍵，為保護(hù)沉淀，通常設(shè)為中等或低速檔，如 “5" 和 “5"。

（4）啟動(dòng)離心：

關(guān)緊離心機(jī)蓋。

按綠色的 “Start" 按鈕。離心機(jī)將開始運(yùn)行。

（5）結(jié)束處理：

運(yùn)行結(jié)束后，會(huì)發(fā)出“嘀"聲。轉(zhuǎn)子會(huì)緩慢停止。

不要立即打開蓋子！ 等待轉(zhuǎn)子停止后，再打開蓋子。

小心取出離心管，將上清液小心轉(zhuǎn)移至新的50mL離心管中，避免吸到管底的沉淀。棄去沉淀。

3、第3步：高速離心濃縮外泌體

（1）重復(fù)平衡： 將轉(zhuǎn)移后的上清液再次進(jìn)行兩兩平衡。

（2）參數(shù)設(shè)置：

轉(zhuǎn)速/離心力： 設(shè)為 10,000 × g。

溫度： 4°C。

時(shí)間： 60 分鐘。

加速/減速： 同樣設(shè)為 “5" 和 “5"。

（3）啟動(dòng)離心： 同第2步。離心結(jié)束后，小心棄去上清，管底可見(jiàn)的少量沉淀即為粗提的外泌體。

4、第4步：超高速離心最終純化外泌體（100,000 × g - 此步驟需使用超速離心機(jī)，此處為演示5810R的極限操作）

（1）注意： 5810R 的MAX 相對(duì)離心力（RCF）取決于所使用的轉(zhuǎn)子。對(duì)于外泌體提取，通常需要 >100,000 × g 的離心力，這通常需要使用超速離心機(jī)。

（2）本例演示： 假設(shè)我們使用 5810R 兼容的MAX 速轉(zhuǎn)子（如固定角轉(zhuǎn)子 F-35-6-30，MAX 20,200 × g），我們可以進(jìn)行一個(gè)“類超離"步驟來(lái)進(jìn)一步純化。

（3）參數(shù)設(shè)置：

用少量PBS重懸上一步的沉淀。

轉(zhuǎn)速/離心力： 設(shè)為 20,200 × g（該轉(zhuǎn)子的MAX 限速）。

溫度： 4°C。

時(shí)間： 90 分鐘。

加速/減速： 設(shè)為高檔 “9" 和低檔 “1"，以快速達(dá)到速度和輕柔停止，防止沉淀重懸。

（4）啟動(dòng)離心： 同前。結(jié)束后，管底會(huì)有一個(gè)非常緊實(shí)的沉淀，即為較純的外泌體。小心棄去全部上清，用適量PBS重懸沉淀，-80°C保存。

5、結(jié)束工作

離心結(jié)束后，取出所有樣本和轉(zhuǎn)子（如果需要）。

用軟布擦拭離心機(jī)腔體和轉(zhuǎn)子，保持清潔干燥。

關(guān)閉離心機(jī)電源。

二、關(guān)鍵注意事項(xiàng)與技巧

1、平衡是重要要?jiǎng)?wù)！ 不平衡會(huì)導(dǎo)致離心機(jī)劇烈震動(dòng)，損壞轉(zhuǎn)軸和轉(zhuǎn)子，甚至發(fā)生嚴(yán)重事故。

2、正確選擇轉(zhuǎn)子與離心管：

（1）確保所使用的轉(zhuǎn)子與離心管是 Eppendorf 認(rèn)證或兼容的。

（2）注意轉(zhuǎn)子的MAX 速度/離心力限制，不要超速使用。在設(shè)置參數(shù)時(shí)，5810R 的智能系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)根據(jù)安裝的轉(zhuǎn)子限制MAX 速度。

3、規(guī)范開關(guān)蓋：

（1）離心機(jī)運(yùn)行時(shí)和轉(zhuǎn)子未停止前，嚴(yán)禁打開蓋子。

（2）關(guān)蓋時(shí)，應(yīng)輕輕推至閉合，不要用力撞擊。

4、制冷功能的使用：

（1）若需在4°C離心，務(wù)必提前預(yù)冷。

（2）若在室溫離心，可關(guān)閉制冷功能以節(jié)約能源和減少壓縮機(jī)磨損。

5、加速/減速檔位的選擇：

（1）加速檔 (Accel)： 對(duì)于不易分層的樣本或?qū)Τ恋頍o(wú)特殊要求時(shí)，可用高檔（如9）以節(jié)省時(shí)間。對(duì)于梯度離心或怕打散沉淀的樣本，用低檔（如3-5）。

（2）減速檔 (Decel)： 對(duì)于松散的沉淀，使用低檔（如1-3）可以防止制動(dòng)過(guò)快將沉淀沖散。對(duì)于緊實(shí)沉淀或無(wú)要求時(shí)，可用高檔（如9）以快速停止。

6、日常維護(hù)：

（1）定期檢查轉(zhuǎn)子是否有腐蝕或裂痕。

（2）定期清潔腔體，防止樣本泄漏腐蝕機(jī)器。

通過(guò)以上案例，您應(yīng)該能夠掌握艾本德 5810R 離心機(jī)的基本操作邏輯和核心要點(diǎn)。請(qǐng)務(wù)必在實(shí)際操作前仔細(xì)閱讀用戶手冊(cè)，并在有經(jīng)驗(yàn)人員的指導(dǎo)下進(jìn)行。